Particules Lentivirales d'Activation (h) GPNMB: sc-402966-LAC

GPNMB (glycoprotéine non métastatique du mélanome B) est une glycoprotéine transmembranaire de type I, enrichie dans les lignées myéloïdes et les ostéoclastes, qui module l’adhésion et la migration cellulaires ainsi que le remodelage de la matrice extracellulaire. Elle participe à des programmes de signalisation immunitaire et inflammatoire, influence le trafic lysosomal et vésiculaire, et façonne les réponses de réparation tissulaire via une communication croisée avec des voies associées aux intégrines et aux facteurs de croissance. En cancérologie, une expression altérée de GPNMB a été liée à l’invasivité des cellules tumorales, aux interactions avec le stroma et au remodelage du microenvironnement immunitaire, tandis qu’en neurodégénérescence elle est associée à des états de microglie activée et à des réseaux transcriptionnels répondant aux lésions. Ces caractéristiques font de GPNMB un nœud utile pour disséquer les mécanismes de polarisation myéloïde, l’ostéo-immunologie et les phénotypes cellulaires adaptatifs au stress dans des systèmes modèles humains.

Les particules d'activation lentivirales GPNMB (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de GPNMB dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GPNMB (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription GPNMB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GPNMB. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif GPNMB ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.