GPNMB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430005

Übersicht

Gpnmb kodiert das Glykoprotein „glycoprotein non-metastatic melanoma protein B“ (GPNMB), ein Typ‑I‑Transmembran-Glykoprotein, das besonders in Makrophagen, dendritischen Zellen, Osteoklasten, Melanozyten und Mikroglia angereichert ist. GPNMB ist an lysosomalem und endosomalem Transport, Phagozytose, Umbau der extrazellulären Matrix sowie an Zelladhäsionsprogrammen beteiligt, die Immunaktivierung und Gewebereparatur mitprägen. Seine Expression wird häufig durch Entzündungssignale und zellulären Stress induziert und verknüpft es mit Signalwegen, die die myeloide Polarisierung, Knochenresorption und die Pigmentbiologie steuern. Eine dysregulierte GPNMB-Expression wurde mit Modellen für Neuroinflammation und Neurodegeneration, metabolischem und fibrotischem Remodeling sowie Phänotypen der Tumor‑Immun‑Mikroumgebung in Verbindung gebracht, was GPNMB zu einem nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien in Mausmodellen macht.

Das GPNMB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Gpnmb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Gpnmb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Gpnmb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPNMB-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Gpnmb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPNMB-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Gpnmb-Exone abzielen, die für die GPNMB-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Gpnmb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPNMB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GPNMB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Gpnmb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPNMB HDR-Plasmid (m) und GPNMB HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Gpnmb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Gpnmb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.