Plasmide Double Nickase (h) GPI-PLD: sc-404938-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GPI-PLD correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPI-PLD Double Nickase (h) et le plasmide GPI-PLD Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPLD1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GPI-PLD Antibody (D-10): sc-365096
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GPI-PLD | sc-404938-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GPI-PLD | sc-404938-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPLD1 code la phospholipase D1 spécifique du glycosylphosphatidylinositol (GPI‑PLD), une enzyme sécrétée qui hydrolyse les ancres GPI et régule la libération des protéines ancrées au GPI depuis les membranes cellulaires vers les compartiments extracellulaires. En modulant l’association membranaire de diverses protéines ancrées au GPI, la GPI‑PLD peut influencer la signalisation intercellulaire, les processus liés à l’immunité et le trafic tissulaire de protéines liées aux lipides. L’expression de GPLD1 et l’activité circulante de la GPI‑PLD ont été étudiées dans le cadre de la biologie métabolique et inflammatoire, notamment en lien avec la résistance à l’insuline, des voies associées au foie et une modulation immunitaire systémique. Ces liens fonctionnels font de GPLD1 une cible utile pour des études mécanistiques du renouvellement des ancres GPI, de l’activité enzymatique extracellulaire et du remodelage du protéome.
GPI-PLD Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPLD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPLD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPLD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPLD1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.