GPD2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402698-NIC

GPD2 kodiert die mitochondriale Glycerol-3-phosphat-Dehydrogenase, eine zentrale flavoproteinhaltige Komponente des Glycerophosphat-Shuttles, der zytosolische Reduktionsäquivalente in die Mitochondrien überträgt, indem er die Oxidation von Glycerol-3-phosphat mit der Reduktion von Ubichinon koppelt. Diese Aktivität verknüpft die Glykolyse mit der oxidativen Phosphorylierung, beeinflusst das zelluläre Redoxgleichgewicht und unterstützt den Lipid- und Glycerolipidstoffwechsel durch die Kontrolle der Glycerol-3-phosphat-Pools. Durch die Beeinflussung des mitochondrialen Elektronentransports und der Bildung reaktiver Sauerstoffspezies trägt GPD2 zur metabolischen Flexibilität unter Nährstoffstress und in hypoxieassoziierten Kontexten bei. Eine fehlregulierte GPD2-Funktion wurde im Zusammenhang mit Phänotypen metabolischer Erkrankungen sowie veränderten bioenergetischen Zuständen untersucht, wie sie in Krebs- und endokrinologisch geprägten Forschungsmodellen beobachtet werden.

GPD2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GPD2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GPD2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GPD2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GPD2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.