Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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golgin 97 Double Nickase Plasmid (h): sc-403152-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das golgin 97 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- golgin 97 Double-Nickase-Plasmid (h) und golgin 97 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GOLGA1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: golgin 97: sc-59820
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
golgin 97 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403152-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
golgin 97 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403152-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GOLGA1 kodiert Golgin 97, ein Coiled-Coil-Golgin, das am trans-Golgi-Netzwerk (TGN) lokalisiert ist und als Vesikel-Tether fungiert, um den retrograden Transport von Endosomen zum Golgi sowie die Organisation der Golgi-Membranen zu koordinieren. Über Interaktionen mit kleinen GTPasen und Tethering-Faktoren trägt Golgin 97 dazu bei, die Sortiergenauigkeit, das Recycling von Fracht sowie den polarisierten Transport aufrechtzuerhalten, die Sekretion und die Homöostase von Membranproteinen unterstützen. Störungen der Golgi-Verankerung und des retrograden Transports werden allgemein mit zellulären Stressantworten, veränderter Rezeptorsignalgebung und Defekten in der Proteinverarbeitung in Verbindung gebracht. Als Bestandteil des endomembranären Transportnetzwerks wird Golgin 97 häufig in Studien zur Golgi-Integrität, Organelldynamik und zu transportabhängigen Phänotypen untersucht, die für Neurodegeneration, Infektionsbiologie und Krebszellbiologie relevant sind.
golgin 97 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GOLGA1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GOLGA1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GOLGA1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GOLGA1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.