GnT-II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407393

Übersicht

MGAT2 codiert die N-Acetylglucosaminyltransferase II (GnT-II), eine Glycosyltransferase des medialen Golgi-Apparats, die einen Schlüsselschritt in der Synthese komplexer N-Glykane katalysiert, indem sie GlcNAc in β1,2-Bindung an den α1,6-Mannose-Arm biantennärer Strukturen anfügt. Diese Aktivität beeinflusst die Reifung von Glykoproteinen, die Rezeptortransport, Zell-Zell-Adhäsion und Wachstumsfaktor-Signalübertragung steuern, und prägt damit die Proteostase der Membran sowie extrazelluläre Interaktionen. Veränderte, MGAT2-abhängige N-Glykan-Verzweigung und -Zusammensetzung wurden in krebsrelevanten Kontexten mit fehlregulierter zellulärer Signalgebung sowie Veränderungen von Migration und Invasivität in Verbindung gebracht und stehen zudem im Zusammenhang mit kongenitalen Glykosylierungsstörungen (CDG), bei denen die Golgi-Prozessierung beeinträchtigt ist. Daher wird MGAT2 häufig in der Glykoproteomik, der Biologie des sekretorischen Weges und in pathway-basierten Analysen des N-Glykan-Remodelings untersucht.

Das GnT-II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MGAT2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MGAT2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MGAT2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GnT-II-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MGAT2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GnT-II-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MGAT2-Exone abzielen, die für die GnT-II-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MGAT2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GnT-II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GnT-II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MGAT2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GnT-II HDR-Plasmid (h) und GnT-II HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MGAT2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MGAT2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.