Plasmide Double Nickase (h) GM2/GD2 Synthase: sc-403592-NIC

B4GALNT1 code la synthase GM2/GD2, une β1,4‑N‑acétylgalactosaminyltransférase résidente du Golgi qui catalyse la conversion des gangliosides dérivés du lactosylcéramide en GM2 et GD2, façonnant ainsi la composition des glycosphingolipides à la surface de la membrane plasmique. En régulant la biosynthèse des gangliosides, cette enzyme influence l’organisation des microdomaines membranaires, la signalisation des récepteurs et les interactions cellule‑cellule, reliant l’état de glycosylation aux voies qui contrôlent l’adhérence et la transduction du signal. Des profils de gangliosides altérés et des modifications de l’activité de B4GALNT1 ont été associés à des changements du développement neural et à des phénotypes neurodégénératifs, et sont fréquemment étudiés dans des contextes où le remodelage des glycosphingolipides affecte l’identité cellulaire et les réponses au stress. En tant qu’enzyme nodale du métabolisme des glycolipides, B4GALNT1 constitue une cible utile pour analyser comment la structure des glycannes module le trafic des protéines, la reconnaissance immunitaire et la présentation des antigènes de surface.

GM2/GD2 Synthase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus B4GALNT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de B4GALNT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de B4GALNT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de B4GALNT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.