Plasmide CRISPR d'Activation (m) glypican-4: sc-420640-ACT

Le gène murin **Gpc4** code la glypican-4, un protéoglycane à héparane sulfate ancré par glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui se localise à la surface cellulaire et dans la matrice extracellulaire, où il module la disponibilité des ligands et l’engagement des récepteurs. La glypican-4 façonne les gradients de morphogènes et de facteurs de croissance et peut influencer des voies de signalisation telles que Wnt/β-caténine, Hedgehog, FGF et BMP via des interactions dépendantes de l’héparane sulfate. Par ces fonctions, **Gpc4** contribue à la mise en place des patrons de développement, au remodelage tissulaire et aux décisions de destinée cellulaire, et une signalisation médiée par les glypicans altérée a été associée à une prolifération et une différenciation dérégulées dans des contextes pertinents pour la maladie. Dans des modèles murins, **Gpc4** est également étudié en lien avec des phénotypes métaboliques et inflammatoires, notamment la biologie du tissu adipeux et des réseaux de signalisation sensibles à l’insuline.

glypican-4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gpc4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

glypican-4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gpc4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gpc4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de glypican-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gpc4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de glypican-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie glypican-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de Gpc4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.