Plásmido Doble Nickase (h) glypican-1: sc-402002-NIC

El GPC1 humano codifica la glicpican-1, un proteoglucano de heparán sulfato anclado por glicosilfosfatidilinositol (GPI), enriquecido en la superficie celular y en vesículas extracelulares. La glicpican-1 se une a factores de crecimiento y morfógenos con afinidad por la heparina para modular la señalización de receptores tirosina quinasa y vías del desarrollo, incluidas las rutas de FGF, VEGF, Wnt y Hedgehog, influyendo así en la proliferación, la adhesión, la migración y la organización de la matriz extracelular. A través de sus cadenas de heparán sulfato, modela la disponibilidad de ligandos y sus gradientes en el microambiente pericelular, y contribuye al tráfico endocítico y al ajuste fino de la señalización. La expresión desregulada de GPC1 o su presentación en la superficie se ha asociado con alteraciones de la señalización del microambiente tumoral, comportamiento invasivo y estudios de biomarcadores en múltiples contextos oncológicos, lo que respalda su uso en investigación mecanística en oncología y en comunicación celular.

glypican-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GPC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GPC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GPC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GPC1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.