Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glycophorin C: sc-405123-ACT

GYPC code la glycophorine C, une sialoglycoprotéine majeure de la membrane des érythrocytes humains, qui contribue à l’intégrité de la membrane des globules rouges et à leur charge de surface. La glycophorine C fait partie du réseau du cytosquelette membranaire grâce à des interactions qui soutiennent la liaison entre les protéines transmembranaires et l’armature sous-jacente spectrine–actine, influençant la déformabilité et la stabilité des érythrocytes au cours de la circulation. Les variations génétiques ou une expression modifiée de GYPC sont associées à des phénotypes de membrane érythrocytaire et à la diversité des antigènes de groupes sanguins, et ce gène est étudié dans le contexte des troubles structuraux des globules rouges et des interactions hôte–pathogène affectant les érythrocytes. En tant que glycoprotéine ancrée à la membrane, la glycophorine C constitue également un modèle aisément exploitable pour étudier les programmes de différenciation érythroïde et le trafic des protéines membranaires.

Glycophorin C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GYPC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glycophorin C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GYPC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GYPC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glycophorin C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GYPC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glycophorin C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glycophorin C dans les cellules tumorales présentant une expression de GYPC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.