Plasmide CRISPR d'Activation (h) glycogen synthase 2: sc-402704-ACT

Le gène humain GYS2 code la glycogène synthase 2, une enzyme à expression préférentielle dans le foie et limitante de la vitesse, qui catalyse l’allongement des chaînes de glycogène à partir de l’UDP‑glucose, coordonnant le stockage postprandial du glucose et l’homéostasie glycémique systémique. Son activité est étroitement régulée par phosphorylation et par activation allostérique par le glucose‑6‑phosphate, intégrant la signalisation de l’insuline aux voies de détection des nutriments qui contrôlent le métabolisme hépatique des glucides. La fonction de GYS2 s’inscrit à l’interface du métabolisme du glycogène, de l’équilibre avec la néoglucogenèse et de programmes plus larges d’homéostasie énergétique qui façonnent la physiologie des hépatocytes. Des perturbations génétiques ou régulatrices de GYS2 ont été associées à une gestion anormale du glycogène hépatique et à des phénotypes métaboliques pertinents pour l’étude de la résistance à l’insuline et d’autres dysfonctionnements métaboliques liés au foie.

glycogen synthase 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GYS2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

glycogen synthase 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GYS2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GYS2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de glycogen synthase 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GYS2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de glycogen synthase 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie glycogen synthase 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GYS2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.