Glutathione Peroxidase 8/GPX8 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404847-ACT

Humanes GPX8 (Glutathionperoxidase 8) ist eine mit dem endoplasmatischen Retikulum (ER) assoziierte Glutathionperoxidase, die zur Redoxhomöostase beiträgt, indem sie Peroxide reduziert und oxidative Proteinschäden innerhalb des sekretorischen Weges begrenzt. Durch die Gestaltung der oxidativen Faltungsbedingungen im ER und des Peroxidflusses beeinflusst GPX8 die Proteostase, die Signalgebung der Unfolded-Protein-Response (UPR) sowie umfassendere zelluläre Signalwege des oxidativen Stresses. Eine veränderte GPX8-Expression oder -Aktivität wurde in der Literatur mit einer dysregulierten Redoxbalance und inflammatorischer Signalgebung in Verbindung gebracht, mit berichteter Relevanz in Kontexten wie der Tumorbiologie und metabolischem Stress. Daher wird GPX8 häufig im Hinblick auf seine Rolle in ROS-abhängiger Signalgebung, der Anpassung an ER-Stress und redoxgesteuerten Zellzustandsübergängen untersucht.

Glutathione Peroxidase 8/GPX8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GPX8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Glutathione Peroxidase 8/GPX8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GPX8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GPX8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Glutathione Peroxidase 8/GPX8-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GPX8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Glutathione Peroxidase 8/GPX8-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Glutathione Peroxidase 8/GPX8-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GPX8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.