Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glutathione Peroxidase 7/GPX7: sc-404694-ACT

GPX7 code la glutathion peroxydase 7, une peroxydase thiol localisée dans le réticulum endoplasmique (RE) qui contribue à contrôler les niveaux de peroxyde d’hydrogène et d’hydroperoxydes lipidiques afin de préserver l’homéostasie rédox. En limitant les dommages oxydatifs aux protéines et en soutenant la formation de ponts disulfure ainsi que la protéostasie, GPX7 s’articule avec la signalisation du stress du RE, les voies de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) et des réseaux antioxydants plus larges. Une activité altérée de GPX7 a été associée à des phénotypes induits par le stress oxydatif, affectant l’intégrité épithéliale, la signalisation inflammatoire et des contextes de transformation cellulaire. En tant que régulateur rédox, GPX7 est fréquemment étudiée dans des modèles d’adaptation au stress, de dysfonctionnements liés au métabolisme et de biologie tumorale, où les espèces réactives de l’oxygène (ROS) façonnent la signalisation et la survie.

Glutathione Peroxidase 7/GPX7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPX7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glutathione Peroxidase 7/GPX7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPX7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPX7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glutathione Peroxidase 7/GPX7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPX7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glutathione Peroxidase 7/GPX7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glutathione Peroxidase 7/GPX7 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPX7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.