Glutathione Peroxidase 4/GPX4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401558-ACT

GPX4 (Glutathionperoxidase 4) kodiert eine selenabhängige Phospholipid‑Hydroperoxidase, die mithilfe von Glutathion Membranlipid‑Hydroperoxide reduziert, die Redoxhomöostase aufrechterhält und die Membranintegrität bewahrt. Als zentraler Suppressor der Ferroptose ist GPX4 in den Glutathionstoffwechsel, die Kontrolle der Lipidperoxidation und antioxidative Abwehrwege eingebunden und beeinflusst mitochondriale sowie ER‑assoziierte Antworten auf oxidativen Stress. Eine dysregulierte GPX4‑Aktivität wurde mit veränderter Empfindlichkeit gegenüber oxidativer Schädigung und ferroptotischem Zelltod in Zusammenhängen wie Krebsbiologie, Neurodegeneration und entzündungsbedingten Gewebeschäden in Verbindung gebracht. Seine Expression und enzymatische Leistungsfähigkeit werden daher breit in Modellen der Anreicherung von Lipid‑ROS, des eisenabhängigen Zelltods und der Stressadaptations‑Signalgebung untersucht.

Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GPX4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GPX4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GPX4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Glutathione Peroxidase 4/GPX4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GPX4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Glutathione Peroxidase 4/GPX4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Glutathione Peroxidase 4/GPX4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GPX4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.