Plasmide CRISPR/Cas9 KO Glut12 (m): sc-436139

Présentation

Slc2a12 code le transporteur de glucose 12 (GLUT12), un transporteur facilité des hexoses qui soutient la captation basale du glucose ainsi que la captation stimulée par l’insuline, selon le type cellulaire et l’état métabolique. Dans les tissus de souris, GLUT12 contribue à l’homéostasie du glucose cellulaire et s’intègre aux voies qui contrôlent l’utilisation de l’énergie, notamment la glycolyse, le métabolisme du glycogène et la signalisation insuline/PI3K–AKT. Des altérations de l’expression ou du trafic de Slc2a12 ont été associées à l’adaptation métabolique dans les tissus sensibles à l’insuline et pourraient influencer des phénotypes liés à l’obésité, à la résistance à l’insuline et aux réponses de stress cardiométabolique associées. L’étude de la fonction de Glut12 aide à préciser comment les différents membres de la famille des GLUT répartissent les flux de glucose entre les tissus et comment la redondance des transporteurs façonne la résilience métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Glut12 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slc2a12 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slc2a12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slc2a12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Glut12.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slc2a12 pour l'étude de la signalisation de Glut12, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Slc2a12 essentiels à la fonction de Glut12
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slc2a12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Glut12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Glut12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slc2a12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Glut12 plasmide HDR (m) et le Glut12 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slc2a12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slc2a12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.