GluR-6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402982-ACT

GRIK2 kodiert die ionotrope Glutamatrezeptor‑Untereinheit GluR‑6 (auch als Kainatrezeptor‑Untereinheit 2 bezeichnet), einen ligandengesteuerten Kationenkanal, der eine schnelle exzitatorische Neurotransmission im zentralen Nervensystem vermittelt. GluR‑6‑haltige Rezeptoren regulieren die synaptische Übertragung und Plastizität über Na⁺/K⁺‑Flüsse und aktivitätsabhängige Ca²⁺‑Signalgebung und beeinflussen damit die neuronale Erregbarkeit und die Entwicklung neuronaler Schaltkreise. Durch die Formung der postsynaptischen Depolarisation und nachgeschalteter Signalkaskaden ist GRIK2 an Signalwegen beteiligt, die Lernen, Netzwerkoszillationen und exzitotoxische Stressantworten steuern. Eine genetische und funktionelle Fehlregulation der Kainatrezeptor‑Signalübertragung wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen sowie einer erhöhten Anfallsanfälligkeit in Verbindung gebracht, wodurch GRIK2 ein relevantes Ziel für mechanistische neurowissenschaftliche Studien darstellt.

GluR-6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GRIK2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GluR-6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GRIK2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GRIK2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GluR-6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GRIK2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GluR-6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GluR-6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GRIK2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.