Glucose Transporter Glut8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403183-ACT

SLC2A8 codifica il trasportatore facilitativo del glucosio GLUT8, un carrier associato alle membrane intracellulari e alla membrana plasmatica che contribuisce all’assorbimento e alla ridistribuzione degli esosi nelle cellule metabolicamente attive. GLUT8 supporta l’omeostasi energetica cellulare regolando la disponibilità di glucosio per la glicolisi, il metabolismo del glicogeno e programmi più ampi di sensing dei nutrienti, integrandosi con vie che coordinano la risposta all’insulina e il traffico degli organelli. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione di SLC2A8 sono state studiate in contesti di disregolazione metabolica, risposte allo stress ossidativo e utilizzo dei combustibili specifico di tessuto. Nella ricerca biomedica, GLUT8 viene utilizzato per indagare come l’abbondanza e la compartimentalizzazione dei trasportatori influenzino la crescita e la differenziazione cellulari, nonché la preferenza per i substrati.

Glucose Transporter Glut8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC2A8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Glucose Transporter Glut8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC2A8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC2A8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Glucose Transporter Glut8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC2A8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Glucose Transporter Glut8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Glucose Transporter Glut8 nelle cellule tumorali con espressione di SLC2A8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.