Plasmide CRISPR d'Activation (h) GLI-2: sc-400839-ACT

GLI2 code pour GLI‑2, un facteur de transcription à doigts de zinc qui constitue l’un des principaux effecteurs nucléaires de la signalisation Hedgehog en aval de PTCH1 et de SMO. En se liant aux éléments consensus GLI, GLI‑2 régule des programmes transcriptionnels qui contrôlent la mise en place des plans embryonnaires, les décisions de destinée cellulaire, le maintien des cellules souches/progénitrices, ainsi qu’une prolifération et une différenciation dépendantes du contexte. L’activité de GLI2 est modulée par le clivage protéolytique, la phosphorylation et des interactions avec SUFU et d’autres cofacteurs, intégrant des interactions croisées avec des voies telles que TGF‑β, WNT et PI3K/AKT. Une expression ou une activation dérégulée de GLI2 est associée à des anomalies du développement et est fréquemment impliquée dans des états transcriptionnels oncogéniques dans de nombreux types tumoraux, ce qui en fait une cible utile pour les études de voie et de mécanismes de maladie.

GLI-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GLI2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GLI-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GLI2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GLI2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GLI-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GLI2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GLI-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GLI-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GLI2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.