Plásmido Doble Nickase (h) Gl Syn: sc-401090-NIC

GLUL codifica la glutamina sintetasa (Gl Syn), una enzima citosólica clave que cataliza la conversión dependiente de ATP de glutamato y amoníaco en glutamina, apoyando así la asimilación de nitrógeno y la homeostasis de aminoácidos. Al controlar los reservorios intracelulares de glutamina, GLUL influye en el metabolismo central del carbono, la anaplerosis y las vías biosintéticas vinculadas a la síntesis de nucleótidos y proteínas. La actividad de GLUL se integra con el ciclo glutamato–glutamina, el equilibrio redox y las respuestas celulares a la disponibilidad de nutrientes. La expresión o función desregulada de GLUL se ha asociado con estados metabólicos alterados observados en la biología del cáncer, la fisiología neurológica y procesos metabólicos relacionados con el hígado, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la reprogramación metabólica.

Gl Syn El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GLUL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GLUL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GLUL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GLUL alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.