Plasmide CRISPR/Cas9 KO GIT2 (m): sc-424063

Présentation

GIT2 (G protein-coupled receptor kinase-interacting ArfGAP 2) est une protéine échafaudage ArfGAP activant les GTPases ARF, qui coordonne le trafic membranaire et le remodelage du cytosquelette en intégrant des signaux provenant de kinases associées aux GPCR et de petites GTPases. Dans les cellules de souris, GIT2 agit au sein de complexes de signalisation paxilline/PIX/PAK pour réguler le renouvellement des adhésions focales, l’étalement cellulaire et la migration dirigée, en couplant ces processus à la dynamique de l’actine et à l’endocytose. Elle contribue également à la signalisation en réponse au stress et à l’internalisation des récepteurs, en reliant les réseaux d’adhésion et de signalisation qui façonnent les réponses cellulaires aux signaux de l’environnement. Des voies associées à GIT2 dérégulées ont été étudiées dans des contextes impliquant une motilité altérée et une signalisation inflammatoire, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques du remodelage tissulaire et des comportements cellulaires liés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GIT2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Git2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Git2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Git2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GIT2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Git2 pour l'étude de la signalisation de GIT2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Git2 essentiels à la fonction de GIT2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Git2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GIT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GIT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Git2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GIT2 plasmide HDR (m) et le GIT2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Git2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Git2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.