GHS-R1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401724-ACT

GHSR kodiert den Growth-Hormone-Secretagogue-Rezeptor GHS‑R1, einen ghrelinresponsiven GPCR der Klasse A, der endokrine und neurometabolische Signalwege reguliert. Nach Ligandenbindung koppelt GHS‑R1 vor allem an Gq/11 und aktiviert dadurch die Phospholipase C, den Inositolphosphat-Umsatz, die Mobilisierung von intrazellulärem Ca2+ sowie nachgeschaltete MAPK/ERK- und PI3K-assoziierte Signalwege; zusätzlich kommt es zu Crosstalk über β‑Arrestin-Scaffolding. Dieser Rezeptor verknüpft Nährstoffsensorik mit der Aktivität der Hypothalamus‑Hypophysen-Achse und beeinflusst damit Appetitregulation, die Ausschüttung von Wachstumshormon und die Energiehomöostase. Veränderungen in der GHSR-Expression oder -Signalübertragung wurden mit Adipositas-assoziierten Merkmalen, metabolischer Dysregulation und endokrinen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistisches Ziel in der Rezeptorpharmakologie und in Studien zu Signalnetzwerken unterstützt.

GHS-R1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GHSR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GHS-R1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GHSR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GHSR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GHS-R1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GHSR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GHS-R1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GHS-R1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GHSR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.