GH-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401171-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GH-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GH-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und GH-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GH2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GH-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401171-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GH-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401171-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Wachstumshormon 2 (GH2) kodiert GH‑2, eine plazentare Variante des Wachstumshormons, die die Signalübertragung über den Wachstumshormonrezeptor aktiviert und dadurch systemische wachstumsbezogene Prozesse sowie die metabolische Homöostase beeinflusst. Die Aktivität von GH‑2 steht mit der Modulation der JAK2/STAT-, MAPK/ERK- und PI3K/AKT-Signalwege in Zusammenhang und verknüpft endokrine Signale mit Transkriptionsprogrammen, die die Nährstoffverwertung und die Regulation der Insulin-like-Growth-Factor(IGF)-Achse steuern. In der Humanbiologie wurden veränderte Dynamiken des plazentaren Wachstumshormons mit einer Fehlregulation des mütterlich‑fetalen Wachstums und der metabolischen Anpassung assoziiert, wodurch GH2 ein relevanter Genort für mechanistische Studien zur endokrinen Signalübertragung ist. Da GH2 Sequenz- und Funktionsüberschneidungen mit anderen Mitgliedern der Wachstumshormon-Familie aufweist, eignet es sich zudem, um paralogspezifische Regulation und Rezeptorbindung in Zellmodellen zu untersuchen.
GH-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GH2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GH2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GH2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GH2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.