GGTase-IIβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406913

Übersicht

RABGGTB kodiert die Beta‑Untereinheit der Rab‑Geranylgeranyltransferase (GGTase‑IIβ), eine zentrale Komponente des heterodimeren Enzyms, das die Geranylgeranylierung von Rab‑GTPasen katalysiert. Diese Lipidmodifikation ist essenziell für die Membranassoziation von Rab‑Proteinen und für Transportfunktionen, die das Abschnüren von Vesikeln, die endosomale Sortierung, autophagiebezogene Membrandynamiken und die regulierte Sekretion steuern. Über ihren Einfluss auf Rab‑abhängige Transportrouten trägt GGTase‑IIβ zur Organellenidentität und zur räumlichen Kompartimentierung von Signalwegen im gesamten Endomembransystem bei. Eine Fehlregulation der Rab‑Prenylierung und des vesikulären Transports wurde mit Neurodegeneration, Immundysfunktion sowie krebsassoziierten Veränderungen des Membrantransports und des Rezeptor‑Recyclings in Verbindung gebracht.

Das GGTase-IIβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RABGGTB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RABGGTB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RABGGTB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GGTase-IIβ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RABGGTB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GGTase-IIβ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RABGGTB-Exone abzielen, die für die GGTase-IIβ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RABGGTB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GGTase-IIβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GGTase-IIβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RABGGTB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GGTase-IIβ HDR-Plasmid (h) und GGTase-IIβ HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RABGGTB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RABGGTB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.