GFRαL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-436523

Übersicht

Das murine Gen **Gfral** kodiert **GFRαL (GFRAL)**, einen glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-verankerten Korezeptor, der selektiv **GDF15** bindet und über die **RET**-Rezeptortyrosinkinase signalisiert. Dieser Signalweg aktiviert nachgeschaltete **MAPK/ERK**- und **PI3K/AKT**-Signalwege, um neuronale Schaltkreise zu regulieren, die Energiebilanz, Fressverhalten und die systemische metabolische Homöostase steuern. Die GFRAL-Expression ist in Hinterhirnregionen angereichert, die an der Appetitkontrolle beteiligt sind, und verknüpft damit die **GDF15–GFRAL–RET**-Signalgebung in präklinischen Modellen mit der Regulation des Körpergewichts und stressassoziierten anorexieähnlichen Reaktionen. Entsprechend wird **Gfral** breit in der neurometabolischen Signalgebung, in der Kachexie-bezogenen Biologie sowie in Mechanismen untersucht, die entzündliche Signale mit der zentralen Regulation des Stoffwechsels verbinden.

Das GFRαL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Gfral-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Gfral-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Gfral nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GFRαL-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Gfral-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GFRαL-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Gfral-Exone abzielen, die für die GFRαL-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Gfral-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GFRαL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GFRαL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Gfral-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GFRαL HDR-Plasmid (m) und GFRαL HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Gfral-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Gfral-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.