GFRα-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-405061-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GFRα-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GFRα-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und GFRα-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GFRA3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GFRα-3: sc-398618
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GFRα-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405061-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GFRα-3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405061-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GFRA3 kodiert den humanen GDNF-Familienrezeptor Alpha-3 (GFRα-3), einen über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) membranverankerten Korezeptor, der Artemin bindet und die Ligandenerkennung an die RET-Tyrosinkinase-Signalübertragung koppelt. Dieser Rezeptorkomplex aktiviert nachgeschaltet die MAPK/ERK-, PI3K/AKT- und PLCγ-Signalwege, die das neuronale Überleben, die Differenzierung und die Axonleitung steuern, und trägt außerdem zur Funktion peripherer sensorischer Neurone bei. Die GFRA3-Signalgebung ist eng mit der neurotrophen Kontrolle der Sensibilisierung von Nozizeptoren und der Verarbeitung entzündlicher Schmerzen verknüpft; veränderte Expression wurde im Zusammenhang mit Nervenverletzungen, Mechanismen neuropathischer Schmerzen und Tumor–Nerven-Interaktionen untersucht. Als Korezeptor an der Zelloberfläche bietet GFRα-3 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um ligandspezifische Dynamiken der RET-Signalwege und den neuroimmunen Crosstalk zu analysieren.
GFRα-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GFRA3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GFRA3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GFRA3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GFRA3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.