GFRα-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405061

Descripción general

GFRA3 codifica el receptor alfa-3 (GFRα-3) de la familia del factor neurotrófico derivado de la línea celular glial (GDNF) en humanos, un correceptor anclado a GPI que confiere especificidad de ligando para el factor neurotrófico artemina y otros ligandos relacionados de la familia GDNF. Tras la unión del ligando, GFRα-3 coopera con la tirosina quinasa receptora RET para iniciar cascadas de señalización que incluyen MAPK/ERK y PI3K/AKT, las cuales regulan la supervivencia neuronal, la diferenciación y la guía axonal. GFRA3 se estudia ampliamente en el desarrollo del sistema nervioso periférico y en las interacciones neuroinmunes, donde la señalización alterada receptor‑ligando se ha vinculado con mecanismos relevantes para la función de las neuronas sensoriales y el procesamiento del dolor inflamatorio. La señalización desregulada de RET/familia GDNF en la que participa GFRA3 también se investiga en contextos de señalización de células tumorales, invasión y comunicación con el microambiente en determinados modelos de cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GFRα-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GFRA3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GFRA3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GFRA3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GFRα-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GFRA3 para la investigación de la señalización de GFRα-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GFRA3 críticos para la función de GFRα-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GFRA3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GFRα-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GFRα-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GFRA3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GFRα-3 (h) y el plásmido HDR GFRα-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GFRA3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GFRA3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.