Gfi-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420535-ACT

Il gene murino **Gfi1** codifica il repressore trascrizionale a dita di zinco **Gfi-1**, un regolatore chiave dei programmi delle cellule staminali e progenitrici ematopoietiche, che modella l’impegno di linea e la maturazione nei compartimenti del sangue e del sistema immunitario. Gfi-1 agisce tramite il legame al DNA e il reclutamento di complessi corepressori, influenzando lo stato della cromatina e le reti trascrizionali che controllano proliferazione, differenziamento e sopravvivenza. Interagisce con vie che regolano la segnalazione responsiva alle citochine e lo sviluppo mieloide/linfoide, motivo per cui è ampiamente studiato nei meccanismi di omeostasi immunitaria. Un’attività deregolata di Gfi-1 è stata associata a ematopoiesi aberrante e a circuiti trascrizionali leucemogeni, supportandone l’uso come bersaglio di ricerca nello sviluppo del sangue e in modelli di patologie ematologiche.

Gfi-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Gfi1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Gfi-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Gfi1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Gfi1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Gfi-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Gfi1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Gfi-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Gfi-1 nelle cellule tumorali con espressione di Gfi1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.