Gfi-1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420535-ACT

Das Mausgen **Gfi1** kodiert den Zinkfinger-Transkriptionsrepressor **Gfi-1**, einen zentralen Regulator von Programmen hämatopoetischer Stamm- und Vorläuferzellen, der die Linienfestlegung und Reifung in Blut- und Immunkompartimenten prägt. Gfi-1 wirkt durch DNA-Bindung und die Rekrutierung von Korepressor-Komplexen und beeinflusst dadurch den Chromatinzustand sowie Transkriptionsnetzwerke, die Proliferation, Differenzierung und Überleben steuern. Es ist mit Signalwegen verknüpft, die die zytokinresponsive Signalübertragung sowie die myeloide und lymphoide Entwicklung regulieren, weshalb es in Mechanismen der Immunhomöostase breit untersucht wird. Eine dysregulierte Gfi-1-Aktivität wird mit abweichender Hämatopoese und leukämogenen Transkriptionsschaltkreisen in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als Forschungstarget in Modellen der Blutentwicklung und hämatologischer Erkrankungen stützt.

Gfi-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Gfi1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Gfi-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Gfi1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Gfi1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Gfi-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Gfi1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Gfi-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Gfi-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Gfi1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.