CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
GFAT1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403022-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GFAT1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GFAT1ダブルニカースプラスミド（h）およびGFAT1ダブルニカースプラスミド（h2）は、GFPT1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: GFAT1 抗体 (D-9): sc-377479
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GFAT1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403022-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GFAT1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403022-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GFPT1は、フルクトース-6-リン酸とグルタミンからグルコサミン-6-リン酸を生成するヘキソサミン生合成経路の律速酵素であるグルタミン：フルクトース-6-リン酸アミドトランスフェラーゼ1（GFAT1）をコードしています。UDP-GlcNAc産生へのフラックスを制御することで、GFAT1はタンパク質のN型およびO-GlcNAc修飾、ERにおけるタンパク質品質管理、ならびにグルコースやアミノ酸の利用可能性に連動した代謝センシングに影響を与えます。この経路はインスリンシグナル伝達、ストレス応答、糖タンパク質合成と交差しており、GFPT1は栄養状態を翻訳後修飾および細胞恒常性へと結び付ける重要な結節点として位置づけられます。GFPT1活性やヘキソサミン経路の出力の変化は、先天性筋無力症候群や、疾患関連のヒト病態コンテキストにおける糖鎖付加異常および代謝表現型の破綻と関連づけられています。
GFAT1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GFPT1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GFPT1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GFPT1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GFPT1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。