Gelsolin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401005

Übersicht

GSN kodiert Gelsolin, ein calciumreguliertes aktinbindendes Protein, das Aktinfilamente durchtrennt und „capped“, um das Zytoskelett‑Remodeling und die Zellmechanik zu steuern. Durch die Modulation der Dynamik der Aktinpolymerisation trägt Gelsolin zu Prozessen wie Zellmotilität, Adhäsion, Endozytose und Apoptose bei und ist in Signalwege eingebunden, die Stressreaktionen und den Membrantransport regulieren. Eine veränderte GSN-Expression oder Gelsolin-Aktivität wurde mit Veränderungen des Gewebeumbaus und inflammatorischen Mikroumgebungen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext der Invasion von Krebszellen, neurodegenerativer Erkrankungen und der kardiovaskulären Biologie untersucht. Als zentraler Regulator des Aktinfilament-Umsatzes stellt Gelsolin einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um aktinabhängige Phänotypen in unterschiedlichen humanen Zellmodellen zu untersuchen.

Das Gelsolin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GSN-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GSN-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GSN nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Gelsolin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GSN-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Gelsolin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GSN-Exone abzielen, die für die Gelsolin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GSN-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Gelsolin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Gelsolin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GSN-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Gelsolin HDR-Plasmid (h) und Gelsolin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GSN-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GSN-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.