Gelsolin CRISPR Activation Plasmid (m): sc-432743-ACT

Das Mausgen **Gsn** kodiert Gelsolin, ein multifunktionales aktinbindendes Protein, das Aktinfilamente schneidet, kappt und nucleiert, um den Umbau des Zytoskeletts zu steuern. Durch die Regulation der Aktindynamik nachgeschaltet an Kalziumsignalgebung und Phosphoinositid-Interaktionen beeinflusst Gelsolin Veränderungen der Zellform, Migration, Adhäsion, Endozytose sowie wound-like Prozesse der Membranreparatur. Die Gelsolin-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die Mechanotransduktion und das Verhalten inflammatorischer Zellen steuern, wodurch Expression und Regulation von **Gsn** für Studien zu Gewebeumbau, Neuroinflammation und tumorassoziierten Motilitätsphänotypen relevant sind. Veränderte Gelsolin-Spiegel wurden in unterschiedlichen Krankheitskontexten berichtet, in denen die Organisation des Aktinzytoskeletts und Stressantworten gestört sind.

Gelsolin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Gsn-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Gelsolin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Gsn-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Gsn-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Gelsolin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Gsn-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Gelsolin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Gelsolin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Gsn-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.