Plásmido CRISPR de Activación (m) Gelsolin: sc-432743-ACT

El gen **Gsn** del ratón codifica **gelsolina**, una proteína multifuncional de unión a actina que corta, tapa y nuclea los filamentos de actina para controlar la remodelación del citoesqueleto. Al regular la dinámica de la actina aguas abajo de la señalización por calcio y de las interacciones con fosfoinosítidos, la gelsolina influye en los cambios de forma celular, la migración, la adhesión, la endocitosis y los procesos de reparación de la membrana similares a los de una herida. La actividad de la gelsolina se cruza con vías que gobiernan la mecanotransducción y el comportamiento de las células inflamatorias, lo que hace que la expresión y regulación de **Gsn** sean relevantes para estudios de remodelación tisular, neuroinflamación y fenotipos de motilidad asociados a tumores. Se han descrito niveles alterados de gelsolina en diversos contextos patológicos en los que la organización del citoesqueleto de actina y las respuestas al estrés están perturbadas.

Gelsolin El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Gsn sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Gelsolin El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Gsn en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Gsn, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Gelsolin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Gsn y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Gelsolin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Gelsolin en células tumorales con expresión de Gsn silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.