Plásmido Doble Nickase (m) GD3 synthase: sc-422942-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)GD3 synthase consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GD3 synthase (m) y el plásmido de doble nickasa GD3 synthase (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a St8sia1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GD3 Synthase Anticuerpo (B-11): sc-390123
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) GD3 synthase | sc-422942-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) GD3 synthase | sc-422942-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen St8sia1 de ratón codifica la sintasa de GD3 (ST8SIA1), una sialiltransferasa α2,8 que convierte GM3 en GD3 e inicia la biosíntesis de gangliósidos de las series b y c en el aparato de Golgi. Al moldear la composición de gangliósidos en la membrana plasmática, la sintasa de GD3 influye en la organización de las balsas lipídicas (lipid rafts), la señalización de receptores y procesos posteriores, como la adhesión, la migración y la diferenciación celulares. La actividad de St8sia1 se entrecruza con el metabolismo de los glucosfingolípidos y con vías inmunitarias y neuronales en las que los gangliósidos modulan las respuestas a factores de crecimiento y citocinas. Se han asociado perfiles alterados de gangliósidos que involucran GD3 con señalización desregulada y programas de estrés celular relevantes en sistemas modelo de neurodesarrollo y oncogénesis, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la glicosilación de membrana.
GD3 synthase El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus St8sia1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de St8sia1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de St8sia1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con St8sia1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.