Plasmide CRISPR d'Activation (h) GCSFR: sc-402269-ACT

CSF3R code le récepteur humain du facteur de stimulation des colonies de granulocytes (GCSFR), un récepteur de cytokines de classe I qui contrôle l’engagement de la lignée neutrophile, la différenciation granulocytaire et la survie des cellules hématopoïétiques. L’activation du récepteur induite par le ligand mobilise la signalisation JAK/STAT — en particulier STAT3 et STAT5 — et s’articule avec les voies MAPK/ERK et PI3K/AKT afin de coordonner la prolifération et la maturation fonctionnelle. Une signalisation CSF3R dérégulée ainsi que des variants du récepteur ont été associés à une homéostasie altérée des cellules myéloïdes et à une granulopoïèse aberrante, ce qui rend cet axe pertinent pour l’étude des programmes de différenciation myéloïde et de la dynamique des cellules inflammatoires. En tant que récepteur de surface aux sorties transcriptionnelles en aval bien définies, GCSFR constitue un nœud utile pour la cartographie mécanistique des voies de signalisation et les analyses de réseaux transcriptionnels dans des modèles de recherche en immunologie et en hématologie.

G-CSFR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CSF3R sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

G-CSFR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CSF3R dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CSF3R, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de G-CSFR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CSF3R natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de G-CSFR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie G-CSFR dans les cellules tumorales présentant une expression de CSF3R silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.