Plasmide Double Nickase (h) GCS-β-1: sc-403225-NIC

GUCY1B3 code la sous-unité β3 de la guanylate cyclase soluble (sGC-β-1), un récepteur clé de l’oxyde nitrique qui catalyse la conversion du GTP en cGMP. Cet axe NO–sGC–cGMP régule la relaxation du muscle lisse vasculaire, la fonction plaquettaire et la neurotransmission via des effecteurs en aval tels que la protéine kinase dépendante du cGMP et les phosphodiestérases, en intégrant des signaux qui contrôlent le tonus cellulaire et la signalisation sensible à l’état rédox. Des altérations de la signalisation du cGMP et de la composition en sous-unités de la sGC ont été associées à la biologie cardiovasculaire et pulmonaire, aux réponses inflammatoires et à une hémostase dérégulée, faisant de GUCY1B3 une cible utile pour des études mécanistiques de la transduction du signal dépendante du NO. Dans des modèles cellulaires humains, la perturbation de GUCY1B3 peut aider à disséquer la contribution de l’activité de la sGC à la dynamique du cGMP ainsi qu’aux adaptations transcriptionnelles et métaboliques en aval.

GCS-β-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GUCY1B3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GUCY1B3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GUCY1B3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GUCY1B3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.