GCS-α-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404305-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GCS-α-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GCS-α-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und GCS-α-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GUCY1A2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GCS-α-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404305-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GCS-α-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404305-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GUCY1A2 kodiert die Alpha-2-Untereinheit der löslichen Guanylatcyclase (sGC), eines heterodimeren, hämhaltigen Enzyms, das als zentraler Rezeptor für Stickstoffmonoxid (NO) im Zytosol fungiert. Nach NO-Bindung katalysiert die sGC die Umwandlung von GTP zu zyklischem GMP (cGMP) und leitet so die Signalweitergabe über die Aktivierung von PKG, den durch Phosphodiesterasen regulierten cGMP-Umsatz sowie die nachgeschaltete Modulation der Calciumhomöostase und von Phosphorylierungsnetzwerken ein. Diese NO–sGC–cGMP-Achse trägt zur Relaxation der glatten Gefäßmuskulatur, zur Thrombozytensignalgebung und zur breiteren Regulation zellulärer Redox- und Stressantworten in mehreren Geweben bei. Eine Fehlregulation der cGMP-Signalübertragung wurde mit kardiovaskulärer und zerebrovaskulärer Pathophysiologie sowie mit veränderten entzündlichen und fibrotischen Prozessen in Verbindung gebracht, wodurch GUCY1A2 einen relevanten Ansatzpunkt für mechanistische Untersuchungen der NO-abhängigen Signalübertragung darstellt.
GCS-α-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GUCY1A2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GUCY1A2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GUCY1A2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GUCY1A2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.