Plasmide CRISPR/Cas9 KO GCNF (h): sc-406967

Présentation

NR6A1 code le germ cell nuclear factor (GCNF), un récepteur nucléaire orphelin qui agit principalement comme un répresseur transcriptionnel au cours du développement embryonnaire et dans la biologie des cellules germinales. GCNF contribue à la spécification des lignages et au maintien des programmes de différenciation en se liant à des éléments de réponse dans les promoteurs cibles et en recrutant des complexes corépresseurs qui modifient l’état de la chromatine. Dans les cellules humaines, les réseaux régulés par NR6A1 s’entrecroisent avec les circuits de pluripotence et de différenciation, notamment via la répression de gènes tels que POU5F1/OCT4, ce qui l’associe au contrôle épigénétique des transitions développementales. Une activité dérégulée de NR6A1 a été étudiée dans des contextes impliquant une différenciation aberrante et une reprogrammation transcriptionnelle, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des troubles du développement et de la plasticité des cellules tumorales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GCNF (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NR6A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NR6A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NR6A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GCNF.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NR6A1 pour l'étude de la signalisation de GCNF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NR6A1 essentiels à la fonction de GCNF
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NR6A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GCNF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GCNF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NR6A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GCNF plasmide HDR (h) et le GCNF (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NR6A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NR6A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.