GCM2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430769

Übersicht

Gcm2 kodiert den Transkriptionsfaktor GCM2, ein Mitglied der „glial cells missing“-Familie, das an DNA bindet und so linienspezifische Genexpressionsprogramme reguliert. In der Mausentwicklung ist GCM2 entscheidend für die Festlegung und Aufrechterhaltung der Nebenschilddrüsenidentität und koordiniert Transkriptionsnetzwerke, die über die Regulation parathormonassoziierter Signalwege die Calcium- und Phosphathomöostase unterstützen. Eine Störung von Gcm2 beeinträchtigt Differenzierung und die Identität endokriner Gewebe und macht das Gen zu einem nützlichen Ansatzpunkt, um die transkriptionelle Kontrolle der Organogenese zu untersuchen. Eine veränderte GCM2-Funktion wird mit Entwicklungsdefekten der Nebenschilddrüse und Phänotypen einer gestörten Mineralstoffhomöostase in Verbindung gebracht, was seine Relevanz in Modellen zu Mechanismen endokriner und metabolischer Erkrankungen unterstreicht.

Das GCM2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Gcm2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Gcm2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Gcm2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GCM2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Gcm2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GCM2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Gcm2-Exone abzielen, die für die GCM2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Gcm2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GCM2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GCM2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Gcm2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GCM2 HDR-Plasmid (m) und GCM2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Gcm2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Gcm2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.