GCM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420510

Übersicht

Gcm1 kodiert den Transkriptionsfaktor GCM1, einen DNA-bindenden Regulator, der für die Differenzierung plazentarer Trophoblasten und die Ausbildung des Labyrinths während der Mausentwicklung essenziell ist. GCM1 steuert Genprogramme, die an der Festlegung von Zellschicksalen, der Bildung von Synzytiotrophoblasten und der verzweigenden Morphogenese beteiligt sind, und koordiniert die Expression von Signalwegen, die Zellfusion, Nährstoffaustausch und die Reifung der vaskulären Schnittstelle regulieren. Eine fehlregulierte GCM1-Aktivität wird mit abnormer Plazentation und beeinträchtigtem fetalem Wachstum in Verbindung gebracht und ist daher für Studien zu Entwicklungsstörungen und zur Pathophysiologie der Plazenta relevant. Zusätzlich zu seiner Entwicklungsfunktion bieten GCM1-abhängige transkriptionelle Netzwerke ein gut untersuchbares System, um linien-/zelltypspezifische Genregulation zu analysieren.

Das GCM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Gcm1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Gcm1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Gcm1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GCM1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Gcm1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GCM1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Gcm1-Exone abzielen, die für die GCM1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Gcm1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GCM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GCM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Gcm1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GCM1 HDR-Plasmid (m) und GCM1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Gcm1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Gcm1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.