Plásmido Doble Nickase (h) GCDH: sc-405887-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GCDH consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GCDH (h) y el plásmido de doble nickasa GCDH (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GCDH. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GCDH | sc-405887-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GCDH | sc-405887-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **GCDH** codifica la **glutaril‑CoA deshidrogenasa**, una enzima mitocondrial dependiente de FAD que cataliza el paso de **descarboxilación oxidativa** en el catabolismo de la **lisina**, la **hidroxilisina** y el **triptófano**. Al canalizar el **glutaril‑CoA** hacia el metabolismo posterior de los **acil‑CoA**, GCDH contribuye al equilibrio redox mitocondrial y se conecta con las vías de oxidación de ácidos grasos y aminoácidos enlazadas a la **flavoproteína de transferencia de electrones (ETF)**. La pérdida de actividad de GCDH se asocia con alteraciones en el manejo de ácidos orgánicos y en respuestas de estrés mitocondrial, relevantes para errores congénitos del metabolismo como la **aciduria glutárica tipo I**. Por ello, GCDH se estudia con frecuencia en el contexto de la función mitocondrial, la toxicidad impulsada por metabolitos y la remodelación de rutas a nivel de vía en modelos de enfermedades metabólicas.
GCDH El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GCDH en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GCDH. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GCDH. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GCDH alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.