GCDH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405887

Descripción general

El gen humano **GCDH** codifica la glutaryl‑CoA deshidrogenasa, una flavoproteína mitocondrial que cataliza la descarboxilación oxidativa del glutaryl‑CoA a crotonil‑CoA durante el catabolismo de la lisina, la hidroxilisina y el triptófano. Esta reacción conecta la degradación de aminoácidos con el metabolismo energético mitocondrial y la homeostasis redox mediante la transferencia de electrones dependiente de FAD. La actividad de GCDH influye en el equilibrio de acil‑CoA y ácidos orgánicos, modulando las respuestas mitocondriales al estrés y la remodelación metabólica ante cambios en la disponibilidad de nutrientes. Las variantes con pérdida de función se asocian con la acidemia glutárica tipo I, y GCDH se estudia con frecuencia en el contexto de la vulnerabilidad neurometabólica, la disfunción mitocondrial y la acumulación de ácidos orgánicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GCDH (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GCDH en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GCDH junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GCDH tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GCDH.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GCDH para la investigación de la señalización de GCDH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GCDH críticos para la función de GCDH
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GCDH para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GCDH CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GCDH CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GCDH. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GCDH (h) y el plásmido HDR GCDH (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GCDH para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GCDH definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.