GBDR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409781

Übersicht

UBAC1 (auch als GBDR1 bezeichnet) kodiert ein Protein mit Ubiquitin-assoziierter Domäne, das an der ubiquitinabhängigen Qualitätskontrolle von Proteinen und der Regulation des Proteinumsatzes beteiligt ist. Durch die Bindung ubiquitinierter Substrate und die Kopplung an das Ubiquitin-Proteasom-System kann UBAC1 Signalwege beeinflussen, die Proteostase, Stressantworten und Signaldynamik steuern – unter anderem durch den kontrollierten Abbau von Komponenten dieser Signalwege. Eine Fehlregulation von Ubiquitinierungsnetzwerken wird allgemein mit aberranter inflammatorischer Signalübertragung, veränderter Zellzykluskontrolle sowie neurodegenerativen und onkogenen Prozessen in Verbindung gebracht, wodurch UBAC1/GBDR1 ein relevanter Knotenpunkt für mechanistische Studien zur ubiquitinvermittelten Regulation ist. Die Untersuchung der UBAC1-Funktion kann helfen zu klären, wie Ubiquitin-Erkennung und -Transport zur Robustheit von Signalwegen unter basalen und Stressbedingungen beitragen.

Das GBDR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des UBAC1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des UBAC1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von UBAC1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GBDR1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von UBAC1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GBDR1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf UBAC1-Exone abzielen, die für die GBDR1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere UBAC1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GBDR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GBDR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des UBAC1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GBDR1 HDR-Plasmid (h) und GBDR1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von UBAC1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten UBAC1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.