GATA4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400122-ACT

GATA4 kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an GATA-Motive bindet und Genprogramme reguliert, die die Herzmorphogenese, die Differenzierung von Kardiomyozyten sowie die Entwicklung endodermal abgeleiteter Gewebe steuern. Es wirkt in netzwerkartigen Programmen zur Festlegung von Zelllinien gemeinsam mit Faktoren wie NKX2-5 und TBX5 und integriert Signaleingänge, um während der Entwicklung und bei Stressantworten die Chromatinzugänglichkeit und den transkriptionellen Output zu modulieren. In adulten Geweben beeinflusst GATA4 hypertrophe Signalwege des Herzens und Überlebensprogramme; veränderte Expression oder Varianten wurden mit angeborenen Herzfehlern und Kardiomyopathien in Verbindung gebracht. Eine fehlregulierte GATA4-Aktivität wird außerdem im Kontext der gastrointestinalen Differenzierung und der onkogenen transkriptionellen Reprogrammierung untersucht.

GATA4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GATA4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GATA4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GATA4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GATA4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GATA4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GATA4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GATA4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GATA4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GATA4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.