GATA-6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400724

Panoramica

GATA6 codifica GATA-6, un fattore di trascrizione a dita di zinco che si lega ai motivi GATA per regolare la specificazione di linea e i programmi di differenziamento nei tessuti derivati da endoderma e mesoderma. Partecipa a reti trascrizionali con fattori come NKX2-5 e membri della famiglia TBX per coordinare l’organogenesi e le decisioni sul destino cellulare, e si integra con input di segnalazione che includono le vie WNT, BMP e TGF-β. Nelle cellule adulte, GATA-6 contribuisce alla regolazione genica nell’epitelio e nel muscolo liscio, al metabolismo cellulare e al rimodellamento trascrizionale in risposta allo stress. Un’attività deregolata di GATA6 è stata associata a difetti dello sviluppo ed è spesso studiata nel contesto di stati di differenziamento alterati e dipendenze trascrizionali osservate in molteplici modelli di malattia, incluso il cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GATA-6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GATA6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GATA6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GATA6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GATA-6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GATA6 per lo studio della segnalazione di GATA-6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GATA6 critici per la funzione di GATA-6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GATA6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GATA-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GATA-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GATA6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GATA-6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GATA-6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GATA6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GATA6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.