Gas6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400978

Übersicht

Growth arrest–specific 6 (GAS6) kodiert Gas6, einen vitamin‑K‑abhängigen, sezernierten Liganden für die TAM‑Rezeptor‑Tyrosinkinasen AXL, MERTK und TYRO3. Die Gas6–TAM‑Signalgebung reguliert Efferzytose, die Dämpfung der angeborenen Immunantwort, Zellüberleben und Migration über Signalwege, zu denen häufig PI3K–AKT, MAPK/ERK und NF‑κB gehören, und hat starke Auswirkungen auf die Makrophagenpolarisierung sowie die endotheliale Homöostase. In menschlichen Geweben trägt die GAS6‑Aktivität zum thromboinflammatorischen Crosstalk bei und kann über AXL/MERTK‑abhängige Programme Tumor‑Immun‑Interaktionen und das Metastasierungsverhalten umgestalten. Eine Fehlregulation der Signalgebung der GAS6/TAM‑Achse wird mit Tumorprogression, chronischer Entzündung, Fibrose und vaskulärer Pathobiologie in Verbindung gebracht, weshalb sie in mechanistischen Studien zur Signalübertragung im Mikromilieu häufig als Ziel dient.

Das Gas6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GAS6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GAS6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GAS6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Gas6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GAS6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Gas6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GAS6-Exone abzielen, die für die Gas6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GAS6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Gas6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Gas6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GAS6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Gas6 HDR-Plasmid (h) und Gas6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GAS6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GAS6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.