GAP1m CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431130
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- GAP1m Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im GAP1m-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GAP1m: sc-135916
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GAP1m CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-431130 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Rasa2 kodiert das Ras-GTPase-aktivierende Protein GAP1m, einen negativen Regulator der Ras-Signalübertragung, der die GTP-Hydrolyse beschleunigt und dadurch die Signalabgabe der MAPK/ERK- und PI3K/AKT‑Signalwege begrenzt. Durch die Feinabstimmung von Stärke und Dauer der Ras-Aktivität beeinflusst GAP1m die Zellzyklusprogression, Differenzierungssignale sowie zytoskelettale Dynamiken, die Migration und Adhäsion prägen. In Mausmodellen wurde eine veränderte Rasa2-Funktion mit fehlregulierter Wachstumsfaktor-Signalgebung sowie aberranten immunologischen und entwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was das Gen für die Untersuchung Ras-getriebener Netzwerk-Umverdrahtung in krankheitsrelevanten Kontexten interessant macht. Seine Rolle als „Bremse“ in der Signalübertragung unterstützt mechanistische Untersuchungen zu Signalweg-Feedback, Signalintegration und kontextabhängiger Aktivierung von Ras-Effektoren.
Das GAP1m CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rasa2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rasa2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rasa2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GAP1m-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rasa2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GAP1m-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Rasa2-Exone abzielen, die für die GAP1m-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rasa2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom GAP1m CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GAP1m CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rasa2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GAP1m HDR-Plasmid (m) und GAP1m HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rasa2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rasa2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.