Plasmide CRISPR d'Activation (h) GAP-43: sc-400632-ACT

Le gène humain **GAP43** code la protéine **GAP-43**, une phosphoprotéine associée à la croissance, enrichie dans les neurones, qui régule la croissance axonale, la motilité du cône de croissance et le remodelage synaptique. GAP-43 est un substrat majeur de la PKC et intègre la signalisation dépendante du calcium à la dynamique membranaire via des interactions avec la calmoduline et les phospholipides, la reliant à la réorganisation du cytosquelette et aux programmes d’extension des neurites. Son expression est régulée au cours du développement et réinduite lors des réponses aux lésions nerveuses, ce qui en fait une cible d’étude de la plasticité et de la régénération neuronales. Une activité ou une expression dérégulée de GAP-43 a été associée à une connectivité synaptique altérée et a été explorée dans le cadre de mécanismes de maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives.

GAP-43 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GAP43 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GAP-43 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GAP43 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GAP43, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GAP-43. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GAP43 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GAP-43 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GAP-43 dans les cellules tumorales présentant une expression de GAP43 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.