GalNAc-T2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430824

Übersicht

Galnt2 kodiert die murine Polypeptid‑N‑Acetylgalactosaminyltransferase GalNAc‑T2, ein im Golgi-Apparat lokalisiertes Enzym, das die mucin‑typische O‑Glykosylierung einleitet, indem es GalNAc auf Serin-/Threoninreste sekretierter und membranständiger Proteine überträgt. Durch die Prägung von Zusammensetzung und Dichte der O‑Glykane beeinflusst GalNAc‑T2 die Proteinfaltung, die Proteaseanfälligkeit, Rezeptor‑Ligand‑Interaktionen und die Organisation der extrazellulären Matrix. Dieses Glykosylierungsprogramm ist mit der Qualitätskontrolle des sekretorischen Weges verknüpft und kann Signalübertragung sowie Zell‑Zell‑Kommunikation über veränderten Transport und eine veränderte Präsentation von Glykoproteinen an der Zelloberfläche modulieren. Eine fehlregulierte O‑Glykosylierung ist umfassend mit Entzündungen, metabolischen Phänotypen und tumorassoziiertem Glykan‑Remodeling in Verbindung gebracht, wodurch Galnt2 ein nützlicher Knotenpunkt zur Untersuchung krankheitsrelevanter Veränderungen des Glykoproteoms ist.

Das GalNAc-T2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Galnt2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Galnt2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Galnt2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GalNAc-T2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Galnt2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GalNAc-T2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Galnt2-Exone abzielen, die für die GalNAc-T2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Galnt2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GalNAc-T2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GalNAc-T2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Galnt2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GalNAc-T2 HDR-Plasmid (m) und GalNAc-T2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Galnt2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Galnt2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.