Plasmide Double Nickase (h) GalNAc-T13: sc-407103-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GalNAc-T13 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GalNAc-T13 Double Nickase (h) et le plasmide GalNAc-T13 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GALNT13. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) GalNAc-T13 | sc-407103-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **GALNT13** code la polypeptide **N-acétylgalactosaminyltransférase 13 (GalNAc‑T13)**, une enzyme résidente de l’appareil de Golgi qui initie l’**O‑glycosylation de type mucine** en transférant un résidu **GalNAc** sur des résidus sérine et thréonine de protéines sécrétées et membranaires. En façonnant les profils d’O‑glycanes, GalNAc‑T13 influence la stabilité des protéines, leur maturation protéolytique et les interactions ligand‑récepteur qui affectent l’adhésion cellulaire, la migration et la transduction du signal au sein de voies dépendantes des glycoprotéines. Des altérations de l’expression de **GALNT13** et des programmes d’O‑glycosylation ont été associées à des phénotypes oncogéniques, notamment des modifications de l’invasivité des cellules tumorales et de leurs interactions avec le microenvironnement extracellulaire. Les études fonctionnelles examinent souvent **GALNT13** dans le cadre de réseaux de glycosylation plus larges qui modulent la reconnaissance immunitaire et la biologie des cellules épithéliales.
GalNAc-T13 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GALNT13 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GALNT13. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GALNT13. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GALNT13.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.