GalNAc-T13 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407103

Übersicht

GALNT13 kodiert die Polypeptid‑N‑Acetylgalactosaminyltransferase 13 (GalNAc‑T13), ein im Golgi-Apparat lokalisiertes Initiationsenzym der mucinartigen O‑Glykosylierung, das GalNAc auf Serin-/Threoninreste neu synthetisierter sekretorischer und membranständiger Proteine überträgt. Durch die Ausprägung von O‑Glykanmustern auf Rezeptoren, Adhäsionsmolekülen und Muzinen kann GalNAc‑T13 die Proteinstabilität, den Transport sowie Ligandeninteraktionen beeinflussen, die in Signalübertragungs- und Zell‑Zell‑Kommunikationsprozesse einfließen. Eine veränderte GALNT13‑Expression wurde in mehreren Tumorkontexten beschrieben und mit Änderungen bösartiger Zellverhaltensweisen wie Invasion und metastatischem Potenzial in Verbindung gebracht, was zu einer Rolle der O‑Glykosylierung bei der Umgestaltung der extrazellulären Schnittstelle passt. Dieses Gen ist daher relevant für Studien zur Glykoproteinbiosynthese, zur Funktion des sekretorischen Wegs und zu glykoregulier­ten Signalnetzwerken in menschlichen Zellen.

Das GalNAc-T13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GALNT13-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GALNT13-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GALNT13 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GalNAc-T13-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GALNT13-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GalNAc-T13-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GALNT13-Exone abzielen, die für die GalNAc-T13-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GALNT13-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GalNAc-T13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GalNAc-T13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GALNT13-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GalNAc-T13 HDR-Plasmid (h) und GalNAc-T13 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GALNT13-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GALNT13-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.