galectin-9 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421420-ACT

Das Mausgen **Lgals9** kodiert **Galectin-9**, ein β-Galaktosid-bindendes Lektin, das Zell–Zell- und Zell–Matrix-Interaktionen durch glykanabhängige Erkennung von Glycokonjugaten auf der Zelloberfläche und in der extrazellulären Matrix reguliert. Galectin-9 trägt zur Immun-Signalübertragung und zur Regulation von Entzündungen bei, indem es die Aktivierung von Leukozyten, Zytokinprogramme und das Gewebe-Trafficking moduliert, mit nachgeschalteten Effekten auf Signalwege, die mit der Biologie von Immun-Checkpoints und stressresponsiver Transkription verknüpft sind. Es beeinflusst außerdem Adhäsion, Migration und Apoptose – Prozesse, die Tumor–Immun-Dynamiken und chronisch entzündliche Mikroumgebungen prägen. Eine dysregulierte Expression von **LGALS9/Galectin-9** wurde mit Autoimmunität, immunpathologischen Verläufen bei Infektionskrankheiten und der Krebsbiologie in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in immunologischen und mikroenvironmentbezogenen Studien unterstützt.

galectin-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Lgals9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

galectin-9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Lgals9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Lgals9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen galectin-9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Lgals9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von galectin-9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des galectin-9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Lgals9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.