galectin-3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417680-ACT

ヒトのLGALS3は、β-ガラクトシド結合性レクチンであるガレクチン3をコードしており、上皮系および免疫系の細胞区画にわたって、細胞―細胞間および細胞―細胞外基質間相互作用、エンドサイトーシス、細胞内シグナル伝達の調節に関与します。ガレクチン3は、マクロファージ活性化、NF-κB関連の転写プログラム、サイトカイン駆動性のリモデリングなど、炎症や自然免疫に結び付く経路を調整し、状況依存的にアポトーシス抵抗性、オートファジー、酸化ストレス応答にも影響し得ます。接着、遊走、細胞外基質のターンオーバーにおける役割を通じて、LGALS3は線維化の生物学や腫瘍微小環境におけるクロストークの研究で頻繁に取り上げられるほか、心代謝および神経炎症プロセスにも関与するとされています。ガレクチン3の発現異常は、慢性炎症状態や複数のがんにおける進行表現型と関連づけられており、機序解明のための経路解析において広く利用される分子ノードとなっています。

galectin-3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LGALS3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

galectin-3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LGALS3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLGALS3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性galectin-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLGALS3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるgalectin-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLGALS3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるgalectin-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。